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单克隆与多克隆抗体及抗原选择方法的918博天堂应用

来源:仲伦罡 日期:2025-03-19

918博天堂提供的多克隆抗体(polyclonal antibody, pAb)是通过免疫动物以一种包含多种抗原决定簇的抗原刺激而产生的。这种方法可以激活多个B细胞克隆,从而生成针对不同抗原表位的抗体,因此所得的免疫血清实际上是各种抗体的混合物。

单克隆与多克隆抗体及抗原选择方法的918博天堂应用

单克隆抗体(monoclonal antibody)则是由单一的B细胞克隆产生,并且针对特定的抗原表位。这类抗体一般通过杂交瘤技术制备,将具备特异性抗体分泌能力的致敏B细胞与具有无限繁殖能力的骨髓瘤细胞融合,形成B细胞杂交瘤。

单多抗的优缺点

多克隆抗体的优点

1. 有助于放大低表达水平的靶蛋白信号;
2. 能识别多个表位;
3. 对抗原中的微小变化更具容忍性;
4. 能识别与免疫原蛋白质高同源性的蛋白质,或能从非免疫物种的组织样本中筛选靶蛋白;
5. 通常是检测变性蛋白质的首选;
6. 多表位的识别可提供更强的检测能力。

多克隆抗体的缺点

1. 容易产生批次间的差异;
2. 可能产生大量非特异性抗体,有时在应用中会引起背景信号;
3. 不适合探测抗原的特定结构域,因为抗血清通常可识别多个结构域。

单克隆抗体的优点

1. 一旦杂交瘤制备成功,便成为稳定的再生源,所有批次均相同;
2. 切片和细胞染色中背景较低;
3. 特异性强,适用于抗原的分析检测,背景染色显著低;
4. 同质性极高;
5. 特异性使其能高效结合混合物中的抗原。

单克隆抗体的缺点

1. 可产生大量特异性抗体,但特异性可能过强;
2. 经化学处理后,较多克隆抗体更易丢失表位,可通过使用同一抗原下的多个单克隆抗体补偿该问题。

单抗与多抗的选择

若对抗体的特异性要求较高,所需用量大或希望长期使用一致的抗体且应用广泛(如WB/IP/IF/ICC等),应选择单克隆抗体。由于多克隆抗体特异性较差,即使使用相同抗原制备,其不同批次间亦可能存在差异,导致在特异性和一致性方面受到限制。在免疫检测中,使用多抗时容易产生背景信号,例如在WB中出现杂带,在IHC中则背景较深。尽管存在交叉反应的问题,但多抗由于能够识别多个抗原表位,通常会对实验结果的影响较小。如果免疫原制备困难,建议使用单克隆抗体。

若对抗体特异性要求不高,需要进行沉淀和凝集反应的检测性实验,或仅需进行ELISA检测,则可以选择多克隆抗体。相较于单抗,多抗在制备时间和首次成本上通常较低,是一种可行选择。此外,在相同条件下,使用多抗能提高检测灵敏度,更易检出丰度较低的蛋白。

抗原的选择

抗原可选用天然蛋白、重组可溶蛋白、重组变性蛋白及多肽,抗原质量越高,最终制备高质量抗体的可能性越大。目前,抗体制备一般采用重组蛋白或多肽作为抗原。通常情况下,重组蛋白作为抗原含有更多的抗原决定簇,既具备空间表位也含有线形序列表位,能更有效地刺激机体免疫,因而获取广泛应用的抗体概率更高。尤其是对于已知有修饰或复杂结构的目的蛋白,重组蛋白通常是优先选择。

当然,有时必须使用多肽进行抗体制备,如需针对同源家族中某一特定蛋白产生成分抗体,或进行化学修饰的抗体制备时,需要在多肽合成中定点修改特定氨基酸。

在选择抗原多肽时,一般遵循以下原则:

  1. 尽量选择位于蛋白表面的肽段;
  2. 确保该序列不形成α-helix结构;
  3. N和C端的肽段效果通常优于中间段;
  4. 避免选择蛋白内部重复或接近重复的序列;
  5. 避免选择同源性过强的肽段;
  6. 交联时可选择N端或C端,偏向于对产生抗体影响较小的端;
  7. 序列中应尽量少有Pro,偶尔一两个Pro有助于肽链结构稳定,从而有利于特异性抗体的产生。

在抗体开发的过程中,选择合适的抗原和抗体类型至关重要,而918博天堂将竭诚为您提供优质的生物医疗产品与服务,助力研究与应用的成功。

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