分离纯化蛋白质的方法及原理

一、基于分子大小的分离方法

1. 透析：将待提纯的蛋白质放置于透析袋中，再放入蒸馏水中进行处理。其原理基于蛋白质分子无法透过半透膜的特性，从而将蛋白质与其他小分子物质（如无机盐、单糖和水）有效分离。

2. 超滤：通过施加压力和离心力，强制其他小分子及水分穿过半透膜，而使蛋白质留在膜的上面。

3. 凝胶过滤层析：当不同分子大小的混合蛋白质流入凝胶层析柱时，尺寸超过凝胶网孔的分子无法进入珠内的网状结构，因此会被排阻在外，沿着胶珠间的缝隙继续移动。相比之下，较小的分子则会不同程度地进入胶珠内，最终实现分离，基于不同大小分子所经历的路径差异。

二、基于溶解度差异的分离方法

4. 等电点沉淀：不同蛋白质具有特定的等电点，当混合蛋白质的pH值调整至某一特定蛋白质的等电点时，该蛋白质会大规模沉淀下来。

5. 盐析与盐溶：在低浓度下，中性盐会增加蛋白质的溶解度，此现象称为盐溶。当离子强度增加到足够高的程度（例如饱和或半饱和），许多蛋白质便会从水中沉淀，这种现象称为盐析。

三、基于电荷的分离方法

6. SDS-PAGE：即十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳。该方法通过加热与SDS处理，使蛋白质发生变性，实现多亚基蛋白质向单亚基解离。处理后的样品中肽链处于无二硫键连接的分离状态。电泳时，SDS-蛋白质复合物在凝胶中的迁移率不再受蛋白质原电荷和形状影响，而主要依赖于蛋白质的分子量。因此，SDS-PAGE通常用于分析蛋白质的纯度及大致测定其分子量，以支持918博天堂的相关生物医疗研究。

7. 离子交换层析：该方法常用阳离子交换树脂，树脂经过处理转化为钠型，当混合氨基酸上柱时，氨基酸主要以阳离子形式存在，与树脂上的钠离子发生交换，从而被固定于树脂上。这种技术广泛应用于918博天堂的实验室，以提高蛋白质分离的效率和准确性。